自体淋巴细胞宫腔灌注对反复种植失败患者妊娠结局的影响分析

赵慧敏

(睢县中医院 妇科，河南 商丘 476900)

摘要：目的 探究自体淋巴细胞宫腔灌注对反复种植失败(RIF)患者妊娠结局的影响。方法 研究对象选取为2016年1月—2018年9月之间睢县中医院收治的68例RIF患者，采用数字表法进行随机分组，对照组34例未接受自体淋巴细胞宫腔灌注，观察组34例则在冷冻胚胎移植前3d进行自体淋巴细胞宫腔灌注治疗，对比两组患者的内膜准备及移植胚胎情况，对比两组患者的妊娠结局。结果 两组患者的人工周期率、平均内膜厚度、平均胚胎移植数、优质胚胎数对比均无显著差异(P＞0.05)；观察组的胚胎种植率、临床妊娠率分别为22.9%、38.2%，对照组的胚胎种植率、临床妊娠率分别为8.5%、8.8%，观察组均显著高于对照组，差异显著(P＜0.05)。结论 自体淋巴细胞宫腔灌注治疗对反复种植失败患者的内膜准备及移植胚胎情况并无明显影响，但能够有效提升胚胎种植率和临床妊娠率，值得临床应用。

关键词：体外受精；淋巴细胞；宫腔灌注；胚胎移植；反复种植失败；妊娠结局

中图分类号：R714.8 文献标志码：A 文章编号：2096―1278(2020)10―0001―02

Analysis of the Effect of Lymphocyte on Pregnancy Outcome in Patients with repeated Implant Failure

ZHAO Huimin

(Department of Gynecology, Suixian Hospital of traditional Chinese medicine, Shangqiu Henan 476900, China)

ABSTRACT: Objective To investigate the effect of intrauterine perfusion of autologous lymphocyte on pregnancy outcome in patients with repeated implantation failure (RIF). Methods A total of 68 patients with RIF admitted to Sui county hospital of traditional chinese medicine between January 2016 and September 2018 were randomly divided into two groups: control group (N=34) and control group (N=34), in the observation group, 34 cases were treated with lymphocyte 3 days before frozen embryo transfer, and the endometrial preparation and embryo transfer were compared. Results There was no significant difference in the artificial cycle rate, mean intima thickness, mean number of embryo transfer and number of high quality embryos between the two groups (P＞0.05), and the embryo implantation rate and clinical pregnancy rate in the observation group were 22.9% and 38.2%, respectively, the embryo implantation rate and clinical pregnancy rate of the control group were 8.5% and 8.8% respectively, and the observation group was significantly higher than the control group (P＜0.05). Conclusion Lymphocyte has no significant effect on endometrial preparation and embryo transfer in patients with repeated implantation failure, but it can effectively improve the implantation rate and clinical pregnancy rate, and is worthy of clinical application.

KEYWORDS: in vitro fertilization; lymphocyte; uterine perfusion; embryo transfer; repeated implantation failure; pregnancy outcome

体外受精—胚胎移植是目前治疗不孕不育患者的重要方案，但受到多种因素的影响，部分患者存在反复着床失败的情况。胚胎着床需要在“植入窗”期间进行，这个过程十分短暂，成功的植入既需要优质胚胎，还需要良好的子宫内膜容受性，才能确保同步发育^[1]。子宫内膜容受性指的是子宫内膜的一种特殊状态，在这种状态下子宫内膜允许胚胎植入和黏附，子宫内膜容受性与组织血运、内膜厚度、微环境等有关，在胚胎植入的过程中除了受到内分泌系统的影响外，同时还受到免疫系统的影响^[2]，后者也是近年来临床研究关注的重点。为了减少药物等因素对子宫内膜的影响，睢县中医院采用自体淋巴细胞宫腔灌注治疗反复种植失败(RIF)患者，取得了较好的成效，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 

研究对象选取2016年1月—2018年9月之间本院收治的68例RIF患者，采用数字表法进行随机分组。观察组34例，年龄24～38岁，平均(31.5±3.4)岁；不孕年限3～11年，平均(7.2±1.4)年；BMI 20.4～24.3 kg/m²，平均(21.7±0.5) kg/m²；不孕类型包括原发性19例、继发性15例。对照组34例，年龄25～38岁，平均(31.7±3.3)岁；不孕年限3～11年，平均(7.1±1.5)年；BMI 20.2～24.5 kg/m²，平均(21.6±0.6) kg/m²；不孕类型包括原发性18例、继发性16例。两组患者基本资料比较无显著差异(P＞0.05)。研究通过伦理委员会审批。

1.2 纳入及排除标准

纳入标准：①确诊为不孕症；②FSH＜15 U/L；③优质胚胎移植≥3次；④患者夫妇双方知情同意。

排除标准：①患者夫妇任意一方染色体核型异常；②患者子宫畸形；③患者合并盆腔器质性病变。

1.3 方法

1.3.1 自体淋巴制备

患者在进行胚胎移植前3 d抽取20 mL静脉血，肝素常规抗凝，37 ℃水浴30 min，取上清液，加入3 mL PBS液，混匀，加入3 mL淋巴分离液，在1 500 r/min条件下离心15 min，取乳白色淋巴细胞层，加入3 mL PBS液，混匀，在1 200 r/min条件下离心10 min，去上清液，加入3 mL PBS液，混匀，在1 200 r/min条件下再次离心10 min，取淋巴细胞团，置于0.9%氯化钠溶液中备用。

1.3.2 宫腔灌注

患者取截石位，0.1%碘伏进行外阴、阴道冲洗，在B超监测下进行灌注，抽取制备好的淋巴细胞，通过人工授精管注入宫腔内，缓慢推注完成后，停留15 s，退出导管，患者保持卧床至少20 min。

1.4 观察指标

对比两组患者的内膜准备及移植胚胎情况，对比两组患者的妊娠结局。胚胎评价标准：卵裂球数≥7，且形状规则，透明带完整，折光度良好，碎片＜10%则视为1级胚胎；卵裂球数≥7，形状基本呈球形但略有不规则，轻度折光，碎片在10%～19%之间则视为2级胚胎；未符合以上标准则视为3级胚胎。以1级胚胎+2级胚胎统计优质胚胎数。妊娠结局统计包括胚胎种植率和临床妊娠率。

1.5 统计学方法

选用SPSS 21.0进行数据处理：计量资料以表示，组间比较采用t检验；计数资料以[n(%)]表示，组间比较采用c²检验。P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结  果

2.1 内膜准备及移植胚胎情况对比

两组患者的人工周期率、平均内膜厚度、平均胚胎移植数、优质胚胎数对比均无统计学差异(P＞0.05)，见表1。

表1  两组患者的内膜准备及移植胚胎情况对比[n(%)，]

2.2 妊娠结局对比

观察组胚胎种植次数70次，胚胎种植率、临床妊娠率分别为22.9%(16/70)、38.2%(13/34)；对照组胚胎种植次数71次，对照组的胚胎种植率、临床妊娠率分别为8.5%(6/71)、8.8%(3/34)，观察组均显著高于对照组(P＜0.05)，见表2。

表2  两组患者的妊娠结局对比（n，%）

3 讨  论

胚胎着床是一个复杂且精细的过程，受到多种因素的影响和调控。RIF指的是患者在移植至少3次及以上优质胚胎仍未获得临床妊娠的情况，RIF的发生率在10%左右，是影响体外受精—胚胎移植效果的主要问题^[3]。近年来辅助生殖技术不断进步，优质胚胎比例明显增加，但RIF仍未有十分有效的解决方案。相关研究表明^[4]，大约70%的RIF患者是受到子宫内膜容受性的影响所致，因此利用各种药物治疗、内膜刺激和宫腔镜手术等方法来改善子宫内膜容受性，能够不同程度的影响患者妊娠结局，但存在不良反应明显、创伤性疼痛等缺陷。

随着分子生物学研究的进展，关于RIF的分子生物研究也取得了一定的成果。相关研究显示^[5]，子宫内膜中的NK细胞数量较少，但分泌期内大量增加，在胚胎种植时数量达到峰值，伴随着蜕膜共同出现。也有研究显示^[6]，大鼠胸腺淋巴细胞能够有效加速子宫内膜分化，对于胚胎种植是一种有利的影响，这提示免疫细胞可能参与了子宫内膜的调节，对植入窗的开启有一定的影响。

在本次研究中采用了自体淋巴细胞宫腔灌注的方式对RIF患者进行治疗，为了避免促排卵药物的影响，所有患者均采用了冷冻胚胎移植，从研究数据来看，两组患者的人工周期率、平均内膜厚度、平均胚胎移植数、优质胚胎数对比均无统计学差异(P＞0.05)。但观察组的胚胎种植率、临床妊娠率均显著高于对照组(P＜0.05)。在宫腔灌注后，患者子宫内膜表现出非感染性的炎性改变，蛋白酶分泌量增加，促进了胚胎信号的传导，实现了胚胎发育和子宫内膜分化的同步进行，同时淋巴细胞能够刺激NK细胞的分泌，能够促进植入窗的开启，实现了子宫内膜的分化，为胚胎顺利着床提供了条件。

综上所述，自体淋巴细胞宫腔灌注治疗对反复种植失败患者的内膜准备及移植胚胎情况并无明显影响，但能够有效提升胚胎种植率和临床妊娠率，值得临床应用。

参考文献

[1]张国青,徐影,张雪莹,等.辅助生殖中反复种植失败的病因及相关对策的研究进展[J].中国妇幼保健,2018,33(8):1908-1911.

[2]黄柳静,李荣,羊海涛,等.改善子宫内膜容受性的研究进展[J].医学综述,2017,23(21):4204-4209.

[3]Eytan R Barnea, David Kirk, Krassimira Todorova, et al. PIF direct immune regulation: Blocks mitogen-activated PBMCs proliferation, promotes TH2/TH1 bias,independent of Ca(2⁺)[J].Immunobiology,2015,220(7):865-875.

[4]Nan Yu, Bo Zhang, Mei Xu, et al. Intrauterine administration of autologous peripheral blood mononuclear cells(PBMCs) activated by HCG improves the implantation and pregnancy rates in patients with repeated implantation failure: a prospective randomized study[J].Am J Reprod Immunol, 2016,76(3):212-216.

[5]刘洋虹,张婧,刘恋,等.宫腔灌注自体外周血单个核细胞治疗对反复种植失败患者妊娠结局的影响及相关机制[J].中华生殖与避孕杂志,2017,37(7):539-544.

[6]Anna Micallef, Nicole Grech, Francesca Farrugia, et al. The role of interferons in early pregnancy[J].Gynecol Endocrinol,2014,30(1):1-6.