《临床研究》十二期文章精选——CDCA7在伴有淋巴结转移的非小细胞肺癌中的临床病理意义

 

CDCA7在伴有淋巴结转移的非小细胞肺癌中的临床病理意义

杨麦青¹，齐宏峰²，庞大斌²，王雪冬¹，邓晓玲¹，杨青波¹

(1.山东省昌邑市人民医院 病理科，山东 昌邑 261300，2.山东省昌邑市人民医院 胸心外科，山东 昌邑 261300)

摘要：目的 揭示CDCA7在伴有淋巴结转移的非小细胞肺癌中的表达状况及临床病理意义。方法 采用免疫组化方法检测分析本院病理科2008年1月至2015年12月间的82例伴有淋巴结转移和88例不伴有淋巴结转移的非小细胞肺癌组织中CDCA7的表达情况，同时探讨在伴有淋巴结转移的非小细胞肺癌中snail与CDCA7表达的关系。结果 CDCA7在非小细胞肺癌组织中的表达明显高于正常肺组织(P＜0.001)；CDCA7在中低分化肺癌组织中的表达明显高于高分化肺癌组织(P=0.004)；CDCA7在伴有淋巴结转移的肺癌组织中的表达显著高于不伴有淋巴结转移的肺癌组织(P=0.013)。CDCA7在肺癌中的表达在不同患者年龄、性别、肿瘤的大小分组中无明显差异(P=0.380、0.940、0.500)。Snail在非小细胞肺癌组织表达明显高于正常肺组织，差异显著(P＜0.001)；snail在中低分化肺癌组织中的表达明显高于高分化肺癌组织(P=0.001)；snail在伴有淋巴结转移的肺癌组织中的表达显著高于不伴有淋巴结转移的肺癌组织(P=0.010)。Snail在肺癌中的表达在不同患者年龄、性别、肿瘤的大小分组中无明显差异(P=0.280、0.470、0.640)。CDCA7与snail在伴有转移的非小细胞肺癌中的表达呈正相关(r=0.370，P＜0.05)；而在不伴有淋巴结转移的非小细胞肺癌中，CDCA7与snail的表达无明显关联(P＞0.05)。结论 CDCA7、snail在伴有淋巴结转移的非小细胞肺癌中的表达明显高于不伴有淋巴结转移的非小细胞肺癌，并且在伴有淋巴结转移的非小细胞肺癌CDCA7的表达与snail的表达呈正相关，提示CDCA7在非小细胞肺癌发生转移中与EMT机制有关，为CDCA7作用机制的研究提供理论依据。

关键词：非小细胞肺癌；转移；CDCA7；snail；机制

中图分类号：R734.2 文献标志码：A 文章编号：2096―1278(2020)12―0001―04

Clinicopathological Significance of CDCA7 in non-small-cell Lung Carcinoma with Lymph Node Metastasis

YANG Maiqing¹, QI Hongfeng², PANG Dabin², WANG Xuedong¹, DENG Xiaoling¹, YANG Changqing¹

(1.Department of Pathology, Changyi People's Hospital, Changyi Shandong 261300, China;2.Department of Cardiothoracic Surgery, Changyi People's Hospital, Changyi Shandong 261300, China)

ABSTRACT: Objective To reveal the expression of CDCA7 in non-small-cell lung carcinoma with lymph node metastasis and its clinicopathological significance. Methods Immunohistochemical method was used to detect the expression of CDCA7 in 82 cases with lymph node metastasis and 88 cases without lymph node metastasis from January 2008 to December 2015 in the department of pathology of our hospital. The relationship between snail and CDCA7 expression in the non-small-cell lung carcinoma with lymph node metastasis was also studied. Results The expression of CDCA7 in lung cancer tissues with lymph node metastasis was significantly higher than that in normal lung tissues (P＜0.001), the expression of CDCA7 in lung cancer tissues with moderate or low differentiation was significantly higher than that in lung cancer tissues with high differentiation (P=0.004), and the expression of CDCA7 in lung cancer tissues with lymph node metastasis was significantly higher than that in lung cancer tissues without lymph node metastasis (P=0.013). The expression of CDCA7 in lung cancer was not significantly different in different age, sex and tumor size groups (P=0.380, 0.940, 0.500). The expression of snail in non-small-cell lung carcinoma was significantly higher than that in normal lung tissue (P＜0.001); The expression of snail in moderately and poorly differentiated lung cancer was significantly higher than that in highly differentiated lung cancer (P=0.001). The expression of snail in lung cancer with non-small-cell lung carcinoma was significantly higher than that in lung cancer without lymph node metastasis (P=0.001). There was no significant difference in the expression of snail among different age, sex and tumor size groups (P=0.280,0.470,0.640). There was a positive correlation between the expression of CDCA7 and snail in the non-small-cell lung carcinoma with metastasis (r =0.370, R＜0.05), but there was no significant correlation between the expression of CDCA7 and snail in the non-small-cell lung carcinoma without lymph node metastasis (P＞0.05). Conclusion The expression of CDCA7 and snail in non-small-cell lung carcinoma with lymph node metastasis was significantly higher than that in non-small-cell lung carcinoma without lymph node metastasis, and the expression of CDCA7 in non-small-cell lung carcinoma with lymph node metastasis was positively correlated with the expression of snail, these results suggest that CDCA7 may be involved in the EMT mechanism in non-small-cell lung carcinoma metastasis, and provide a theoretical basis for the study of the mechanism of CDCA7.

KEYWORDS: non-small-cell lung carcinoma; transfer; CDCA7; snail; mechanism

肺癌作为呼吸系统恶性肿瘤,发病率及死亡率在国内所有恶性系统肿瘤中均处于第一位^[1]。近年来，随着空气污染加重，呼吸系统疾病发病率持续上升。我国非小细胞肺癌患者占所有肺癌患者的80％～85％。以手术为主的综合治疗是治疗非小细胞肺癌的唯一有效手段，而肿瘤的转移是影响肺癌手术治疗的主要因素。在肺癌发生发展中有24%～42%的患者并发胸腔积液，尤其是肺腺癌伴有胸腔积液的发生率高达37%。恶性胸腔积液的出现，意味着肺癌已经浸润胸膜，出现播散，提示了患者生存期短，预后不良^[2-4]。很多肺癌患者在做出最初诊断时，已经伴有转移^[5]。尽管近年来我国医疗水平大幅度提高，但对于肺癌晚期患者，目前尚无特效治疗手段，肺癌患者的五年生存率低，发病率仍呈日益增高的趋势。因此，进一步了解和研究肺癌的转移、浸润机制，是当今肺肿瘤研究的热点。

目前，癌症治疗的副作用大多是对正常增殖细胞的毒性。这些放、化疗针对的靶点对于正常细胞的增殖也是至关重要的。通过研究鉴定与肿瘤细胞特性相关的特殊基因，可以促进对肿瘤细胞更具选择性的治疗方法的发展。

CDCA7基因是Myc基因的下游靶基因，编码371个氨基酸组成的核蛋白^[6-7]。Myc基因是明确的原癌基因，它的靶基因作用于癌细胞的转化。有文献指出CDCA7基因在多种癌组织中表达显著增多，与肿瘤细胞的侵袭、转移相关^[6-8]。伴有转移的非小细胞肺癌中CDCA7表达及作用机制的研究未见报道。上皮间充质转化(EMT)是指上皮细胞粘附性缺失而转变成具有迁移能力的间质细胞的现象，它在胚胎发育、肿瘤转移及组织纤维化过程中都发挥重要的生理、病理作用。Snail是EMT过程中的重要标记物^[9-10]。本实验通过免疫组化方法阐明CDCA7、snail在非小细胞肺癌中的表达情况，并探讨CDCA7与snail的表达在伴有转移的非小细胞肺癌之间的关系，为研究非小细胞肺癌的转移和浸润机制提供实验数据支持。

1 材料与方法

1.1 材料

选取本院病理科2008年1月至2015年12月间未经放化疗的非小细胞肺癌组织170例，年龄31～86岁，平均年龄(60±5)岁。在肺癌患者中伴有淋巴结转移的非小细胞肺癌标本82例，不伴有淋巴结转移的非小细胞肺癌标本88例。全部病例均经手术病理、细胞学及临床检查确诊为非小细胞肺癌患者。同时随机选取60例癌旁正常的肺组织与肺癌组织做对比，所有临床病理资料完整。

1.2 方法

手术切除标本经4%的中性甲醛液固定，常规脱水，石蜡包埋、切片，HE染色，光镜观察。免疫组化 CDCA7兔抗人多克隆抗体(工作浓度1:100)、snail兔抗人多克隆抗体(工作浓度1:100)购买于武汉三鹰生物技术有限公司。所有非小细胞肺癌蜡块标本均经临床、高年资病理医师确诊。常规石蜡4 μm切片。免疫组织化学采用SP法。所有标本均采用同种方法。用PBS液替代一抗作为阴性对照。

1.3 结果判定

免疫组化根据美国临床肿瘤学会ASCO分级对CDCA7、snail染色结果进行判读。CDCA7阳性：棕黄色颗粒定位于细胞核；snail阳性：棕黄色颗粒定位于细胞核。染色阳性的肿瘤细胞区域占所有肿瘤细胞＜5%、5%～25%、26%～50%、51%～75%、＞75%，分别计数为0、1、2、3、4分。肿瘤细胞着色的强度分别标记-、+、++、+++，各计数0、1、2、3分。两者相乘然后判读，＜6分判定为低表达，≥6分判定为高表达，见图1。

1.4 统计学方法

所有的实验数据均采用SPSS 17.0统计学软件进行分析：采用卡方检验及Spearman相关性分析。P＜0.05判定为差异有统计学意义。

2 结  果

2.1 CDCA7、snail表达与临床病理参数间的关系

CDCA7 在非小细胞肺癌组织中[腺癌49/112(48.0%)，鳞状细胞癌33/68 (48.5%)]的表达明显高于正常肺组织[13/60 (21.6%)]，差异显著(P＜0.001)；CDCA7在中低分化肺癌组织中的表达[46/75 (61.3%)]明显高于高分化肺癌组织[36/95 (37.9%)](P=0.004)；CDCA7在伴有淋巴结转移的肺癌组织中的表达[51/88 (58.0%)]显著高于不伴有淋巴结转移的肺癌组织[31/82 (37.8%)](P=0.013)。CDCA7 在肺癌中的表达在不同患者年龄分组(≥60岁、＜60岁)、性别分组(男性、女性)、肿瘤的大小分组中(＞2 cm、≤2 cm)无明显差异(P=0.380、0.940、0.500)。见表1。

Snail在非小细胞肺癌组织[腺癌28/112 (24.9%)，鳞状细胞癌48/68 (70.6%)]表达明显高于正常肺组织 [9/60 (15.0%)]，差异显著(P＜0.001)；snail在中低分化肺癌组织中的表达[44/75 (58.7%)]明显高于高分化肺癌组织[32/95 (33.7%)](P=0.001)；snail在伴有淋巴结转移的肺癌组织中的表达[48/88 (54.5%)]显著高于不伴有淋巴结转移的肺癌组织[28/82 (34.1%)](P=0.010)。Snail在肺癌中的表达在不同患者年龄分组(≥60岁、＜60岁)、性别分组(男性、女性)、肿瘤的大小分组中(＞2 cm、≤2 cm)无明显差异(P=0.280、0.470、0.640)。见表1。

2.2 非小细胞肺癌CDCA7表达与snail表达的相关性

CDCA7与snail在伴有转移的非小细胞肺癌中的表达呈正相关(r=0.370，P＜0.05)；而在不伴有淋巴结转移的非小细胞肺癌中，CDCA7与snail的表达无明显关联(P＞0.05)。

表1  非小细胞肺癌CDCA7、snail表达与临床病理参数的关系

表达类型	组织				肿瘤分化			淋巴结转移			肿瘤大小			性别			年龄
	正常 肺组织	肺癌组织			高分化	中、低分化		无	有		＞2cm	≤2cm		男	女		≥60岁	＜60岁
		腺癌	鳞状细胞癌
例数	60	102	68		95	75		82	88		65	105		98	72		96	74
CDCA7高表达 (n=82)	13(21.6)	49(43.7)	33(48.5)		36(37.9)	46(61.3)		31(37.8)	51(58.0)		34(52.3)	48(45.7)		47(48.0)	35(48.6)		43(44.8)	39(52.7)
P	＜0.001				0.004			0.013			0.500			0.940			0.380
Snail高表达 (n=76)	9(15.0)	28(24.9)	48(70.6)		32(33.7)	44(58.7)		28(34.1)	48(54.5)		31(47.7)	45(42.9)		41(41.8)	35(48.6)		39(40.6)	37(50.0)
P	＜0.001				0.001			0.010			0.640			0.470			0.280

 

3 讨  论

正常细胞要转化为高度恶性的肿瘤细胞，要具有许多特性，包括维持慢性增殖的能力，保持单克隆无限增殖等。这涉及复杂的基因表达异常和基因作用机制的改变。Myc基因是编码核蛋白的基因，是人类肿瘤中最常见的原癌基因。伯基特淋巴瘤特征性遗传标记是涉及Myc基因的突变^[11]。Myc基因家族及其产物可促进细胞增殖、去分化和转化等，在肺癌、乳腺癌、结肠癌等多种肿瘤形成过程中处于重要地位^[12-14]。

Myc基因调节了人类基因组中大约15%的基因，其中包括一些参与肿瘤形成的基因。然而，目前尚不清楚哪些基因对Myc诱导的转化至关重要。CDCA7基因，也叫作JPO1，定位于染色体2q31，作为Myc基因的直接下游靶基因，其表达也可由E2F转录因子和Notch转录诱导^[7-8]，它参与细胞周期过程，与细胞转录功能密切相关。近几年文献指出CDCA7与淋巴瘤的发生密切相关^[8,15]，实验发现在正常的组织培养条件下，CDCA7在淋巴肿瘤细胞中的高表达水平介导了肿瘤锚定独立生长和肿瘤的发生。Raúl Jiménez-P等发现在正常二倍体成纤维细胞中敲除CDCA7不能抑制其增殖，但敲除CDCA7基因，能够微调细胞骨架蛋白结构而抑制淋巴瘤细胞的侵袭和转移能力，但不能影响淋巴瘤细胞的增殖能力^[15]。通过抑制CDCA7表达或干预其功能的疗法可能显著抑制淋巴瘤细胞的生长，同时不影响正常细胞的增殖，这为淋巴瘤的治疗提供了新的研究方向。同时文献指出，CDCA7在三阴乳腺癌细胞系和组织中出现异常高表达，并且高表达CDCA7三阴乳腺癌患者预后不良，说明敲除CDCA7基因能够抑制三阴乳腺癌细胞的增殖、侵袭、转移能力^[16]。在食管癌细胞系和直肠癌组织中也发现CDCA7表达增多的现象^[17-18]，但CDCA7在癌发生、发展中的作用机制研究甚少。

肿瘤细胞转移是肿瘤患者死亡的主要原因，肿瘤细胞转移需要获得迁移能力，并涉及多个步骤，包括局部肿瘤细胞侵入和穿透基底膜。EMT机制在肿瘤侵袭转移过程中至关重要^[19]。Snail是一类锌指DNA结合蛋白，是EMT过程中重要的调控因子^[9-10]。国内外文献报道，snail在多种肿瘤中高表达，参与EMT介导的肿瘤侵袭转移过程^[20]。

CDCA7与snail之间的关系几乎没有报道。CDCA7作为Myc基因的下游靶基因，可能会同时与snail相互作用，参与EMT机制。本实验通过免疫组化方法检测非小细胞肺癌中CDCA7、snail蛋白的表达情况，并分析在伴有淋巴结转移和不伴有淋巴结转移的非小细胞肺癌中CDCA7、snail的表达差异，发现CDCA7、snail在伴有淋巴结转移的非小细胞肺癌中的表达明显高于不伴有淋巴结转移的，并且在伴有淋巴结转移的非小细胞肺癌中CDCA7的表达与snail的表达呈正相关。以上实验数据提示，CDCA7作为Myc基因的下游靶基因，与肺癌的进展密切相关，在肺癌的侵袭转移过程中，与EMT关系密切。但它是如何影响EMT机制的，还需要进一步研究。肿瘤的转移和复发，一直是影响肿瘤患者预后的主要因素。探索肿瘤侵袭和转移机制是肿瘤研究的热点。而本实验发现CDCA7的表达与EMT过程中重要的标记物snail相关。它们之间的相互作用和关系需要我们进一步去阐述和探索。

综上所述，CDCA7基因作用于癌症的发生、发展，其作用机制可能与EMT相关。本研究在实验中的发现也为以后更好地研究和探讨CDCA7的作用机制提供了理论依据。

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